PCR结果条带过亮过粗如何修正？

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/03 09:26:25
模板浓度已经降至0.1ng，引物浓度也仅为2.5pM，可条带还是很亮，而且比Marker条带要粗3-5倍。有必要再做梯度降低吗？还有哪些参数可以修改呢？请大师详解。谢谢。
我知道问题出在哪里了：它本身特异性很好，又引物浓度不准确（测OD计算后，发现高出一倍），将引物浓度降低就好了。问题已经解决了，好想给自己悬赏分哈！不管怎样还是谢谢大家了。

共勉吧！

稀释模板，而且建议你检查你的引物特异性怎样。

提高退火温度
这种情况属于特异性不好，解决方法一般有降低dNTP和Mgcl2的浓度，不然就提高退火温度，使其在退火结合时对双链配对的精确度要求更高

降低引物浓度似乎没什么意义了，再降低模板浓度试试。