血液中转氨酶活力怎么测定？

实验六：肝脏谷丙转氨酶活力测定
[日期：2005-4-18] 来源： 作者：lt [字体：大 中 小]

一目的

了解转氨酶的性质及临床意义

掌握谷丙转氨酶活力的测定方法

二原理

在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基地大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。本实验以丙氨酸和a-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。

a-酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处a-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和a-酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。

三 实验材料、器材

鸡肝脏

研钵

试管

试管架

玻璃搅拌棒

滴管

容量瓶

电子天平

分光光度计

吸管

四 实验试剂

标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05M H2SO4中，现用现配。

谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。然后用1 M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1M 的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。

0.1M pH7.4 PBS：称取13.97g K2HPO4和2.69g KH2PO4溶于蒸馏水中，定容到1000ml。

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