pcr反应体系如何建立？

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/21 04:54:11
我做的是基因组的pcr，想扩增其中一个基因的一段，我设计的引物
上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6
下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的含量是 50.0
这个反应体系怎么设定？

从两条引物Tm看，退火温度大致在52~57℃左右。在这个范围内做下温度梯度。标准PCR体系就可以。
ps：引物有些偏长。

标准的PCR反应体系：

10×扩增缓冲液 10ul

4种dNTP混合物 各200umol/L

引物 各10～100pmol

模板DNA 0.1～2ug

Taq DNA聚合酶 2.5u

Mg2+ 1.5mmol/L

加双或三蒸水至 100ul