关于酶切

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/20 18:31:05
已经构建好的载体
转进农杆菌里
提质粒
酶切检测
结果一直切不出目的条带
载体比较大
有14K左右
目的片段2000多bp
酶切位点是Xba1和Sac1
用的NEB的酶
Xba1是100000个单位的
Sac1是20000单位的
我20微升和30微升的体系都做过
Xba1加0.4微升
Sac1加2微升
有两次切5小时以上
昨天切过夜
结果还是没有目的条带
不知道什么原因
请大家帮我分析一下

农杆菌中提的质粒不容易进行酶切，可以先PCR检测目标条带，然后将阳性克隆的质粒转如E.coli再提质粒酶切检测就可以了

检测下PCR产物看看，是不是PCR没P出东西？
你的质粒提取出来没?也做个检测看看