请教:氨基酸序列的测定方法

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/07 19:41:47
DNFB法是什么?适合测什么?氨肽酶法呢?Eadam降解法?羧肽酶法?测五肽用什么最好?(希望大家别嫌麻烦,都讲一讲,谢谢!)

氨基酸的测序有蛋端测序、碳端测序还有酶解的方法
1、氮端测序有DNFB,就是二硝基氟苯,还有丹磺酰氯法,PITC试剂,也就是EDMAN
2、碳端测序有羧肽酶法,还有肼解法氨肽酶
3、还可以用不同的酶水解不同的位置来得到片段序列
最好用EDMAN法,最方便,最准确,而且最常用

有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;羧基肽酶,肼解法;二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。

氨基酸(amino acid):含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。

我只知道DNFB是2,4-二硝基氟苯,Sanger试剂,DNP-多肽,酸水解,乙酸乙酯抽提,然后用纸层析,薄层层析,高压液相等方法分离鉴定氨基酸和定量测定,而Edman用来鉴定多肽和蛋白质的NH2末端氨基酸.其余的我也不太懂

茚三酮与氨基酸反应,先生成紫红色,最终形成蓝紫色化合物。
反应原理:
第1步:
茚三酮+氨基酸----还原型茚三酮+NH3+CO2+醛
此步为紫红色
第2步:
还原型茚三酮+NH3+茚三酮----茚三酮-N=茚三酮+3H2O
此步为蓝紫色。
氨基酸定性测定:
试管中氨基酸溶液1mL,加2滴0.5%茚三酮-乙醇溶液,加热,溶液由粉红色变为紫红色,最后变为兰色。
氨基酸定量测定:
根据此原理,用比色法或分光光度法测定含量。