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胶原海绵的羟脯氨酸含量测定
摘要：选用普通实验室均能实现的Woessner第Ⅰ法对自制胶原海绵和Gelfix(国外样品)进行了羟脯氨酸含量测定，结果表明，该方法操作简单，重复性好：自制胶原海绵的羟脯氨酸含量稳定，与国外样品的羟脯氨酸含量接近，且与胶原蛋白的羟脯氨酸含量接近，证实了两种胶原海绵的纯度均较高。
关键词：胶原海绵；羟脯氨酸；含量测定
胶原海绵是无过敏性、无菌冻干胶原，是促进伤口痊愈的特效药，还可作为各种外科手术填充剂和止血药，疗效显著，用途广泛。羟脯氨酸是胶原的特异性氨基酸，而且含量比较稳定，定量测定胶原水解后的羟脯氨酸含量乃是胶原定量所常用的方法〔1〕。
传统测定胶原特异性氨基酸含量和胶原总量的方法是化学比色法和电泳法，其操作步骤繁琐，影响因素多，样品需要量大，且准确性差。氨基酸分析仪可提供快速、准确、高灵敏度的测定方法〔2〕，但氨基酸分析仪价格昂贵，普通实验室难以实现。Kivirikko〔3〕等报道了一种测定尿液中羟脯氨酸的特殊方法，它适合于羟脯氨酸含量少的样品。Woessner〔4〕等报道了适合于从组织液、动植物中提取的蛋白质等生物材料的羟脯氨酸含量的测定方法，其中Woessner第Ⅰ法操作简便，但易受其它氨基酸影响，仅适用于羟脯氨酸含量高的样品测定。据报道，胶原蛋白的羟脯氨酸含量较高〔5〕，因此，本文选用Woessner第Ⅰ法对自制的胶原海绵进行了羟脯氨酸含量测定，以此作为质量检验的一项重要指标。Gelfix是欧洲科研大药厂生产的胶原海绵，为了对比自制的胶原海绵与国外产品的纯度，本文同时对Gelfix进行了羟脯氨酸含量测定。

1 材料与方法

1.1 试剂与器材
试剂：盐酸，氯胺T，乙二醇甲醚，醋酸，氢氧化钠，枸橼酸钠，醋酸钠，过氯酸，以上均为分析纯；氨基酸标准品，生化标准试剂；氮气：纯度为99.99%。
器材：多功能电子恒温水浴锅，上海凯乐电子设备厂；UV-160A紫外分光光度计，日本岛津；PHS-2C酸度计，天津第二分析仪器厂；LC-222鼓风干燥箱，温度波动±1℃；ZFA84-Z型旋转蒸发器，上海玻璃仪器厂；精密电子天平，美国Denver仪器公司；安培瓶；移液管；带塞试管；容量瓶。