分步双酶切

不用试剂盒，也不用再次纯化pcr产物，会损失。我可以告诉你步骤：如果两种酶的buffer浓度相同可以同时加进去切，如果不相同，先用低浓度切，再用高浓度切。我只说后一种：30/50ul体系中2ul第一种酶，3ul buffer，按照你pcr产物的亮度来配比，不足部分用水补充，反正达到30ul就可以了，切两个小时后，加第二种酶2ul，buffer5ul，用水补到50ul，再切两个小时，电泳检测。

回收PCR产物
在第一个酶切后直接用PCR产物回收试剂盒或Nucleotide Removal Kit纯化酶切样（只需5分钟），保留少量样品做电泳分析之用，再进行下一次酶切。