为什么挑的单克隆在LB培养基中培养了快12个小时，菌液还是那么少，浓度不够，不能测序

可能挑的单克隆活性不高，也有可能是没挑到。
我觉得更像是前一种可能。

你可以从一下几个方面思考：
1 是否菌液中抗生素浓度加的过高？
2 是否培养时间不够？
（因为我们培养常常要超过20个小时，在高浓度抗生素平板上长出菌不容易啊！）
3 是否导入质粒失败？

也可能跟你转化的质粒有关。有些质粒转化后转化子是长的很慢的，如BT340，需30度培养2天才能长出直径1mm左右的转化子。

我觉得可以适当提高平板培养时的温度，我一般都是37度培养，12－16个小时就长出来了，如果超过24小时，就有可能长没有转化的菌落了。

另外有一点需要注意的就是有可能因为抗生素浓度施加过高导致菌体增殖受阻。

可能挑的单克隆活性不高，也有可能是没挑到。
我觉得更像是前一种可能。

你可以从一下几个方面思考：
1 是否菌液中抗生素浓度加的过高？
2 是否培养时间不够？
（因为我们培养常常要超过20个小时，在高浓度抗生素平板上长出菌不容易啊！）
3 是否导入质粒失败？

这是我所想到的，希望对你有帮助。

可能跟你转化的质粒有关。有些质粒转化后转化子是长的很慢的，如BT340，需30度培养2天才能长出直径1mm左右的转化子。

我觉得可以适当提高平板培养时的温度，我一般都是37度培养，12－16个小时就长出来了，如果超过24小时，就有可能长没有转化的菌落了。

另外有一点需要注意的就是有可能因为抗生素浓度施加过高导致菌体增殖受阻。