菌落PCR怎么做

如果是革兰氏阴性菌比如大肠杆菌还好，阳性菌几乎不能成功，因为有很厚的胞壁没法破壁。而阴性菌成功率也不是很高，就用牙签在菌落上挑一点到pcr体系里。但要考虑的是即使鉴定出转化子后你怎么保存这个菌落？再回板上找那个被挑过的残存菌落吗？与其这样不如多花几个小时摇菌液再pcr吧

不是特别明白你所提出的问题， 能SPECIFIC一点吗？

根据我的理解， 你所说的是在做完TRANSFORMATION之后把接种的细菌涂盘， 其中理论上吞噬表达了目标质粒的细菌可以存活， 第二天当菌种长得肉眼可见的时候， 涂抹一点点用来做目标质粒的PCR， PCR成功的表明实验成功， 请问你问的是这个问题吗？

如果是
假阳性不高， 基本上是一种用来快速SCREENING的办法， 就是筛选出很可能成功的菌落。 当然最后的黄金标准仍旧是MINIPREP之后做SEQUENCING了。

做法就是统一配MASTER MIX， 也就是包含BUFFER， MGCL2， PRIMER FORWARD, PRIMER REVERSE， DDNTP， TAQ， 混匀后平均到PCR TUBE里面， 之后每个菌落标号号码， 用TIP的尖稍微抹一点点就好了。 注意抹的时候要在本生灯下做， 要小心点避免污染。 然后按照标号放PCR TUBE里面。 之后PCR然后跑胶就OK了。

我在国外读书， 学的都是英文的， 说的如果不太贴切或者是理解错误请见谅。