什么是增菌培养????

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/06 03:39:05
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增菌培养
取回的样品应在4℃下处理,存放和运送,如果是冷冻样品,则在检验前要保持冷冻状态.
取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤(EB)的均质杯中进行均质,然后转入三角瓶中,30℃培养4h,加入选择性试剂吖啶黄素,萘啶酮酸和放线菌酮,继续培养20h和44h..
2,分离
共培养24h和48h后,取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3+LPM琼脂平板上划线.PALCAM琼脂可替代LPM琼脂.将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h,LPM平板在30℃培养24-48h.然后,把LPM平板放于解剖镜载物台上,以450角入射光从平板下面照射平板,通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落.李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色.用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照.
加入七叶苷和Fe3+的LPM平板不用斜射光系统,选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同.在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环,其它菌也可形成黑色环,但形成时间要在两天以上.李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似.
在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落,分别划线于TSAYE平板上以得到更纯,更典型的单个菌落.食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的,因为在PALCAM和OXA或LPM平板上分离菌落时可能沾有不可见的受抑微生物.挑取5个典型菌落的原因是一个样品中可能分离到一种以上的李斯特氏菌.30℃TSAYE平板培养24-48h,如果不用于动力观察,也可在35℃培养.
3,鉴定步骤
(1)观察TSAYE平板通过斜射光观察,寻找呈兰灰至兰色菌落.在TSAYE上用已知菌作对照.
(2),从30℃或更低温度下培养的TSAYE平板上挑取典型菌落做成湿玻片在油镜下观察.湿玻片用0.85%生理盐水菌悬液制成.如果菌量太少,菌体黏附于载玻片上而呈现非运动性.李斯特氏菌是细短杆菌,可见轻微的旋转及翻滚.与已知的李斯特氏菌的对照相比,球形,大的杆状且快速泳动的都不是李斯特氏菌.
(3)挑取典型菌落进行过氧化氢酶实验,李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应.
(4)取16-24h的培养物进行革兰氏染色,李斯特氏