that 能不能做从句的主语

可以，但是分不同情况
例如：
1.He is the young writer that（who） has authored the book.
他就是那个写了这本书的年轻作家
在这里that就充当了定语引导词也充当主语的成分（也可以用who代替，作用一样）
2.I know that you are a great astronaut.
我知道你是一名伟大的航天员
而在这里，that不充当成分
3.That Tom came late made his teacher angry.
TOM来晚了让老师很生气
这里，that引导一个句子作为主语

而宾语从句和同位语从句一般用that引导的句子，多半是不作为成分的
所以说，that不但可以充当引导词同样也可以充当成分，这还是要看句子的情况而言

看时什么从句~宾语从句和同位语从句只能做引导词
定语从句可以做主语 宾语

可以。
主语：That's right.
宾语：I like taht.

that在引导定语从句时，在从句中作主、宾、表，但是引导名词性从句时（主从，表从，宾从，同位语从句），和状语从句时在从句中不作任何成分。