琼脂糖电泳没有条带的原因?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/16 02:43:25
我跑琼脂糖电泳,用的是梯度PCR扩增产物,但是跑出来之后没有条带,连marker也看不见,是什么原因?我的TBE没有灭菌,也没有调PH值,还有琼脂糖用了快3年了,不会变质了吧?

marker也看不见就是胶的问题了。。检查下胶的浓度还有EB加了没?

都没问题的话就是药品的问题了,呵呵

胶有问题 或者是没加荧光染料

如果琼脂糖能正常凝固,那变质可能性不大。

如果连marker都看不见
1.如果不要求回收而只是看带,TBE可以不用灭菌,但是PH值要调,这影响DNA的迁移率。很有可能你的marker都没跑开。
2.可能是荧光染料过期了或者用量不够,可以考虑在合适范围类适当加大用量或者用EB试试,EB毒性大,但是染色能力比低毒染料强。
3.检查marker的保质期,单独跑一次marker,可能这个marker不行了。
4.点样没点好或者制孔没制好,marker孔破洞了。可以考虑把胶浓度适度配高点,胶稍稍做厚点,孔底和胶底的距离适当拉高点,这样制孔的时候比较难破洞,点样的时候即使新手也难戳穿。

等你marker能跑出带后,确定没问题再跑PCR产物,如果PCR产物在无操作失误的情况下没有带,就是PCR条件和引物设计的问题了。