UC知道请教CTAB法提取DNA质量检测问题
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/31 14:46:02
请教CTAB法提取DNA质量检测问题
DNA液测定230nm、260 nm及280 nm处的光吸收，O D 2 6 0／O D 2 8 0 比值大于2 .0 ，表明有R N A 污染；小于1 .8 ，表明有蛋白质、酚等杂质。O D 2 6 0／O D 2 3 0比值大于2.0表明无小分子和盐类杂质干扰。DNA样品在琼脂糖凝胶电泳只能检测DNA是否断裂成小片段和样品是否混有RNA杂质。对吗？
O D 2 6 0／O D 2 8 0和琼脂糖凝胶电泳都能检测样品是否混有RNA，为什么大家都用电泳法，哪种方法灵敏度高？
DNA液测定230nm、260 nm及280 nm处的光吸收，O D 2 6 0／O D 2 8 0 比值大于2 .0 ，表明有R N A 污染；小于1 .8 ，表明有蛋白质、酚等杂质。O D 2 6 0／O D 2 3 0比值大于2.0表明无小分子和盐类杂质干扰。DNA样品在琼脂糖凝胶电泳只能检测DNA是否断裂成小片段和样品是否混有RNA杂质。对吗？
O D 2 6 0／O D 2 8 0和琼脂糖凝胶电泳都能检测样品是否混有RNA，为什么大家都用电泳法，哪种方法灵敏度高？
RNA的OD260/OD280大于2.0
DNA是1.9左右
有蛋白质的话比值下降，小于1.8就认为有较多的蛋白了。
但是这实际并不是定量的关系，比值受试剂、样品的影响，特别是样品中如果蛋白质对这个波段有吸收峰（实际上经常有）或者有较多的游离碱基，误差就一塌糊涂了。所以这个方法和电泳一样只能作为定性处理。说白了只能判断比值高的就是核酸多，比值低的就是蛋白多，RNA多不多参考一下是否大于2.0。所以个人经验认为DNA粗提物去测吸光度是杀鸡用牛刀，外加不靠谱。
至于电泳，只能检测DNA的情况，RNA因为很难和EB结合，所以无法显示。也就是无法判断RNA的含量。DNA含量也是根据上样量和条带亮度根据经验来判断。
用什么方法要看有什么要求，在满足要求的前提下什么方法简单方便用什么方法。不是说什么方法精确就用什么方法。比如你不过是跑个PCR，何必去检测RNA浓度呢？跑个电泳不就行了么，也省的你洗比色皿。电泳的时候还能上网灌灌水，何乐而不为。要是我，我连RNase都懒得加，对PCR又多大影响，浪费这个钱做什么呢。
如果你的样品需要非常纯净，那就需要去测OD，而且是应该先进行纯化后再去测OD，样品比较纯净的时候吸光度法才比较靠谱，说白了就是检验一下纯化是否成功。