HPLC流速与保留时间

首先是等度还是梯度，如果是梯度的话，不好判断。
如果是等度，单泵，5min与5.4min还是有8%的差异，是否正常需要进一步的检测。测一下流量是否准确，1.0ml/min收集10min，0.5ml/min收集20min，要带压力，用阻尼管或旧色谱柱，柱后采集。
如果是在线混合，可以先分别测一下各泵或各通道的流量，低压混合要测一下比例阀和脱气机是否正常。

正常，流速不是唯一的一个影响保留时间的因素，只要在合理范围内都可以

这个很正常，因为洗脱速度减少一倍，时间增加一倍，