PCR之后电泳没有条带,连引物二聚体都没有?这是怎么回事了?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/03 16:43:29
PCR一直都没出现过引物二聚体,引物二聚体是在溴芬兰的前面么?

我之前跑PCR 也是1···

我个人觉得你应该先从 引物考虑
虽然 PCR 过程中 受很多因素的影响 但是 引物和退火温度无疑是很重要的两个方面
没出现引物二聚体只能说你设计的两端的引物 没有错配啊 等等

你可以找有经验的师兄师姐帮你设计引物 看看 顺便啊学习一下引物设计的经验

引物到了之后,你可以先跑个沉降PCR 看看 比较适合退火温度
我也听师兄说过 可以跑个 TOUCHDOWN

另外 你可以把Mg离子以及DNTP 还有各个溶剂的量 调高一些 看能不能有东西 用我师姐的话说 如果这都跑不出 那就没希望了。。

如果 这样 你还是什么都跑不出 只能怀疑原本序列问题了。。

但是一般是可以跑出来的~

pcr后电泳无条带,一般是pcr本身出问题了,应考虑在pcr过程中的各种因素。

引物二聚体不一定每次都出现, 所以有没有引物二聚体,这不是你应该关心的问题吧,只要你跑胶的时候,marker有条带,就能说明你的电泳没有问题...

ps: 以0.5×TBE作电泳缓冲液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同. 用1×TAE时,也差不多.

你加引物了吗??引物是不是被降解了?荧光染料加了吗?量够吗?