谁有孙强正的乳酸乳球菌食品级分泌性表达载体的构建及报告蛋白的表达，这篇博士论文。帮帮忙，谢谢

目的 构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA).方法 PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前11个氨基酸编码序列,克隆到载体pSH91中,构建食品级分泌性表达载体pSQZ;克隆报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的编码序列nucA到pSQZ中分泌信号后,转化乳酸乳球菌MBP71,构建乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA;采用TB-D法和酶谱法检测乳酸乳球菌分泌性表达的NucA活性.结果 PCR扩增得到usp45基因片段,酶切、连接到载体pSH91中构建了食品级表达载体pSQZ;将扩增的nucA基因片段克隆入载体pSQZ并转化乳酸乳球菌,得到乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA.在TB-D平板上,L lactis MBP71/pSQZ- nucA克隆子周围出现橙色光晕;在酶谱检测中,L lactis MBP71/pSQZ-nucA上清和菌体在18 kDa位置均有橙色条带,但上清条带亮度和宽度大于菌体.结论 成功构建了乳酸乳球菌食品级分泌表达系统,实现了报告蛋白NucA在乳酸乳球菌中分泌性表达,为进一步保护性抗原的分泌性表达研究奠定了基础.

Objective To construct Lactococcus lactis (Lactococcus lactis, L lactis) food-grade secretion expression vector, expression of reporter protein endonuclease (NucA). Method of PCR amplification of unknown Lactococcus lactis secreted protein (Usp45) gene encoding a promoter, ribosome binding sites, secretion signal and mature peptide of 11 amino acid coding sequence was cloned into the vector pSH91