UC知道人类外周血淋巴细胞培养为什么选择培养在72H时收集细胞
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/27 02:18:35
实验步骤
（一）培养液配制（在超静工作台内无菌操作）；
每个培养瓶（容积30ml）中加入5ml培养液，其中含：
RPMI1640 4ml
灭活小牛血清 1ml
PHA 2.5mg
青霉素 500U
链霉素 500ug
依次将上述试剂加入培养瓶中，反复吹打使其混合均匀，用5%NaHCO3调节培养基的pH值至7.2-7.4。
（二）血样本的采集：先以碘酒和75%乙醇消毒皮肤。用2ml灭菌注射器吸取约0.2ml肝素,作静脉穿刺，抽取外周静脉血1ml。转动针筒以混匀肝素
（三）接种：常规消毒后，立即将针头插入灭菌小瓶内，送入超净工作台 ，在火焰旁将血液滴入2～3个盛有5ml培养液的培养瓶内，每瓶0.2～0.3ml（6号针头45度倾斜，约20滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。贴好标签，将培养瓶放在37℃恒温箱内静置培养 72h 。
（一）培养液配制（在超静工作台内无菌操作）；
每个培养瓶（容积30ml）中加入5ml培养液，其中含：
RPMI1640 4ml
灭活小牛血清 1ml
PHA 2.5mg
青霉素 500U
链霉素 500ug
依次将上述试剂加入培养瓶中，反复吹打使其混合均匀，用5%NaHCO3调节培养基的pH值至7.2-7.4。
（二）血样本的采集：先以碘酒和75%乙醇消毒皮肤。用2ml灭菌注射器吸取约0.2ml肝素,作静脉穿刺，抽取外周静脉血1ml。转动针筒以混匀肝素
（三）接种：常规消毒后，立即将针头插入灭菌小瓶内，送入超净工作台 ，在火焰旁将血液滴入2～3个盛有5ml培养液的培养瓶内，每瓶0.2～0.3ml（6号针头45度倾斜，约20滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。贴好标签，将培养瓶放在37℃恒温箱内静置培养 72h 。
72小时是细胞分裂最旺盛的时间，这时候终止分裂，得到 的分裂相是最多的。
通常情况下哺乳动物外周血中是没有分裂细胞的，只有在异常情况下才能发现。外周血中的小淋巴细胞几乎都处于G1期或G0期的非增殖状态。体外培养时经一定剂量的植物血凝素（PHA）刺激，T淋巴细胞可转变为淋巴母细胞，重新进入增殖周期，进行有丝分裂。外周血中的淋巴细胞经过68-72小时（三个周期）的短期培养，即可产生大量的增殖期细胞群。用秋水仙素（细胞分裂阻断剂）积累分裂相，可使处在分裂期的淋巴细胞停留在分裂中期或早中期，从而获得足够的可供分析的中期分裂相。