植物细胞融合的步骤

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/16 15:46:35
急用

原生质体制备——原生质体融合
原生质体制备:一般采用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶(以品种而异),显微镜下观察,细胞变圆 就可以了。离心洗涤 除酶,收集原生质体。纯化原生质体。期间注意用等渗溶液。
原生质体融合:化学融合(常用 PEG聚乙二醇诱导融合法 ),
有条件的话 电融合更可取,需要用到 电融合仪器。最主要和麻烦的是第一步 原生质体制备,融合是靠仪器完成的。

一、去细胞壁(可以是有机械法、酶法)
二、细胞融合(有钙离子法、电泳法)

1.将需要融合的细胞分离出来,在相应的酶的作用下除去细胞壁,原生质体化
2.分别对分离出来的原生质体进行不同的标记
3.用PEG等试剂或物理等方法使得原生质体融合
4.按照2中的标记,筛选融合后的原生质体
5.用相应的酶和物质使得细胞壁再生

先用纤维素酶果胶酶处理获得原生质体,然后用PEG或其它诱导原生质体融合,当融合的原生质体再生出细胞壁时就说明融合成功。