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来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/20 16:52:05
Identification of transformants. In most cloning experiments the major part of the programme will be concerned with the identification of the transformed recombinant clones. Normally the quantity of transforming DNA incorporated into the recipient host will be very much less than the host chromosomal DNA, so identification of product expressed from the transforming fragment will be extremely difficult. However,various methods have been developed to identify clones that carry desired DNA sequences.
(a)Complementation Some in-coming genes are able to complement defective copies of the same gene on the chromosome of the recipient: that is,they code for a normal, active product for which the recipient is deficient. For example, the LACZ gene(coding for galactosidase) will complement a lacz ,galactosidase-deficient host to yield lac recipients which can be selected as red colonies on MacConkey's Agar.
(b)Antibiotic resistance genes These genes confer resistance to an

transformants鉴定。大多数克隆实验的主要部分的计划将会关注识别的重组的复制。正常数量的改造DNA纳入收件人主人会非常少,所以染色体DNA鉴定主人的产品是以改造碎片将是非常困难的。然而,不同的方法来识别克隆已经开发出来,携带所需的DNA序列。
(一)。补充一些即将到来的基因能够补充缺陷基因相同的基因在染色体的接受者,即:它们代码为一个正常的、积极的产品,收件人匮乏。例如,LACZ基因(编码)将补充一个LACZ行业中的应用,galactosidase-deficient宿主产生复合左旋肉碱能被选为收件人在MacConkey红殖民地的平皿。
(b)。抗生素耐药基因,这些基因在毕业典礼上,颁授耐抗生素敏感细胞正常。这可以用质粒pBR322带有基因transformants 100.00%)、氨苄西林电阻,可以选择之一,在媒体包含这些抗生素:外来DNA的基因复制到通常为阻力与其他代码,选择抗生素。
(c)。杂交的一种被广泛使用的分析方法收集重组DNA分子或复制细胞是由殖民地或斑块杂交。细胞含有重组DNA被转移到一个纸过滤和培养。净化、相辅相成的放射性核酸DNA突变,然后在nitrocellulose-bound细胞。DNA杂交和它相辅相成将由放射自显影术:可检测。对杂交会反映在多大程度上的互补性。复制DNA合成一个mRNA模板也可以被用来掩护重组DNA注定要一纸过滤以类似的方式。
(d)。限制endonuclease分析使用这种方法可以确定克隆的DNA产生大小一致的碎片作为一个标准的脱氧核糖核酸(DNA)。分析了制约endonulease映射的碎片,通常是一个先决条件的序列分析。
(e)。免疫学方法发现增加使用免疫学方法,在很大程度上取决于抗体的发展,主要是对蛋白质的产品。
重组DNA鉴定是一个非常隐秘的节目和结果工业克隆的绝大多数的研究仍将特有的信息。这是一个不可避免的,但可惜方面的商业价值的新技术。

遗传工程必须适当的课程架构的大量运用遗传学已开发如此成功,在过去的三十年。尽管如此,这无疑是最令人兴奋的和潜在的最具创意的工业人士。
科学和经济应用重组DNA技术是无限的,包括:
(1)。提高产量的某一特定基因的产物。