做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/04 04:45:42
是指整体35次循环结束后的5min延伸反应

做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应
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这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率。所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制完全,以合成更多的目的分子。

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看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下
我们来看看最后一个循环
先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子
然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧。
引物与单链dna模板结合上去
再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸。
该循环结束。
注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成。

在rna的逆转录时,也有这样的一个步骤。
用途也是一样的。

不知这下有没有讲清楚?

楼主指的延伸反应是退火后的,还是整体35次左右循环结束后的?
退火后的是让其分子链延伸,最后的我就不确定了,刚翻书翻了半天也没找到,似乎是待体系趋于温和、平静,否则容易伤害到刚合成好的DNA。

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PCR反应条件为温度、时间和循环次数。
温度与时间的设置: 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90~95℃变性,再迅速冷却至40 ~60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70~75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100~300bp时)可采用二温度点法,除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
①变性温度与时间:变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下,93℃~94℃lmin足以