PCR反应中Taq酶最适温度为75度,为什么把仪器设为72度?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/25 07:53:23

其实虽然tap酶的最适温度在75度,但处于这个温度下酶失活的速度也较72度要快,而72度时,酶的活力与75度相比虽有下降,但对最终结果影响不大

而且温度高,不利于引物和模板的结合,也不利于合成出的dna链与模板结合。

个人理解,仅供参考。

大概是酶的种类不一样吧。寡核苷酸引物的延伸应该在最适温度下进行,对于Taq酶来说最适温度一般为72-78度。但过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。我们用的也是72度,酶是黄石公园Mushroom Spring的嗜热水生菌(T.aguaticus)的taq。
程序是94度4.5分预变性,94度30秒denature,55度1分aneal,72度1分extension(循环)72度5分结束。

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随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入,PCR已成为一门相当成熟的常规技术,而热聚合酶(即Taq酶)的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶,能够满足多方面的实验需要。那么,如何选择最合适的Taq酶?根据用户经常考虑的指标,如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等,我们在这儿将主要的Taq酶归归类,其性质、用途也就一目了然了。

高特异性Taq酶
高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求,影响PCR特异性的因素很多,包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等,而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程,也为PCR产物快速有效的纯化(PCR产物直接纯化)打下了基础。这类酶最典型的代表是热启动Taq酶。大家都知道,在PCR第一个循环变性之前,有一个升温的过程,引物和模板会有一些非特异性配对,如果这时Taq酶发挥活性,就很容易产生非特异性扩增,由于循环初期模板量非常少,产生的非特异性条带经过后面的指数扩增,就会严重干扰目的片段的扩增,甚至导致特异性条带不能扩出。而热启动Taq酶是必需经过高温才能激活的酶,因此在初始循环的变性之前它没有活性,不会产生非特异性扩增,这就大大提高了PCR扩增的特异性。第一代热启动Taq酶往往