浮尔根染色具体方法?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/06/05 07:54:36
谁知道浮尔根染色具体方法?要详细步骤?

原理
DNA是主要的遗传物质,集中于染色体上。1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验,鉴定了染色体上DNA的存在,故称为孚尔根染色法。孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关,此试剂的基本成分是碱性品红,偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。
碱性品红原为桃红色,当与亚硫酸作用时还原,使醌型变为苯型,由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱,当它与醛基作用时,其分子式又恢复为醌型结构,呈现紫红色

利用1N HCl 、60℃下水解时,可将DNA分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断,使嘌呤脱下,并使去氧核糖C-1位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应,因此利用孚尔根反应,可以鉴定DNA的存在。并广泛应用于核及染色体的研究中。

三、实验材料
植物根尖、减数分裂期的花药、叶片表皮、愈伤组织等。
四、实验器具和药品试剂
显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、青霉素瓶、吸管、烧杯、量筒、切片架、切片盒、小口瓶。
95%乙醇、冰醋酸、碱性品红、偏亚硫酸氢钠、盐酸、活性炭、亮绿。
五、实验方法和步骤
(一)材料准备 取一洋葱鳞茎,置于盛满水的小烧杯上使其长出新根。待根尖长1cm 时,于上午8时剪下根尖进行预处理、固定、保存(请参考实验一)。
(二)水解 实验时,从冰箱取出预先准备好的洋葱根尖,分装到若干个青霉素瓶中,用清水洗三次,换1N HCl洗一次,倾去,换入预热60℃的 1N HCl 3ml,放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟(视材料而定,水解时间可以从10分钟延长至30分钟)。然后吸去热 1N HCl,换入冷1N HCl洗一次,再用清水将根尖洗三次。
水解是本实验成败的关键之一。重要的是温度,应保持在60±0.5℃之间。如果温度过高或时间过长,造成水解过度,醣与醛基之间的键被破坏,醛基流失到水解液中,反之,不能出现潜在的醛基,都不能呈现颜色反应。
(三)染色 吸净水分,加入Schiff试剂避光染色30分钟,然后用漂洗液漂洗2~3次,经水洗