基因工程难题

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/21 20:48:02
如何使下列的限制酶识别位点由一种序列变为第二种, 或由第一种变为第三种?
1GATC
2GATATC
3GATCGATC

这太难了
我认为可以试一下的就是;根据酶的活性中心的改变,这样往往导致酶活性丧失。就是根据核苷酸电荷性质来增加活性中心可以与之发生吸引关系的氨基酸。
我也认为这不可能。
可能你可以克隆出很多酶,包括有活性和无活性的,加入相应当核苷酸序列,最后测定是否降解。
很关注你的想法,虽然有点异想天开。

虽然隔了7年时间。希望还能给你帮助。也可以看看孙明的基因工程第二版第三章
A. |GATC → GATATC
Step 1: Use Sau3AI cleavage thesequence. Now the terminals looks like
-N GATCN-
-NCTAG N-
Step 2: This time we use Klenow adding justdATP, dGTP and dTTP. After this treatment we have
-NGAT GATCN-
-NCTAG TAGN-
Step 3: Now we use S1 enzyme to hydrolyzethe single strand terminal
-NGAT ATCN-
-NCTA TAGN-
Step 4: Use T4 ligase links these terminalstogether
-NGATATCN-
-NCTATAGN-

B. GATC →GATCGATC
Base on the steps of A, while adding dNTPin the step 2.

C. AAGCTT → AAGCGCTT
Step 1: Use HindIII
-A AGCTT-
-TTCGA A-
Step 2: Klenow with dTTP, dCTP and dGTP
Step 3: S1
Step 4: T4

要看限制酶的种类的,不同的限制酶识别不同的脱氧核苷酸序列。

pcr?

如果不考虑工作