谁知道硫酸咔唑法的具体操作步骤?望高手不吝赐教.

1 材料与仪器

0.1% 咔唑试液(50 mg咔唑溶于50 mL 95%乙醇)，葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)、鼠李糖(Rha)、果糖(Fru)均为化学纯，枸杞多糖样品LbGP3，LbGP4，LbP1，LbP2，LbP3由本课题组提供。722分光光度计。

2 方法与结果

2.1 常用的硫酸-咔唑法
2.1.1 标准曲线绘制：精确称取干燥的单糖标准样品10 mg，定容于25 mL容量瓶中。然后准确量取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL单糖标准溶液于带塞试管中，各管加水至1 mL。在冰水浴中向各管加入6 mL浓硫酸，摇匀后，改在85 ℃水浴中保持20 min，取出后冷至室温，各管加0.2 mL咔唑液，在室温下保持2 h，测定吸收度(530 nm)，以浓度对吸收度作标准曲线。
2.1.2 测定各单糖在530 nm处的检测响应：分别准确吸取各种单糖溶液(10 mg/25 mL)0.4 mL，补水至1 mL用2.1.1项下方法测得其吸收值，结果如表1。

表1 咔唑法测定时各单糖在530 nm处的吸收值

Gal Glc Man Xyl Ara Rha Fru GalA GlcA
0.0493 0.1018 0.0503 0.0840 0.0251 0.0140 0.1245 0.2603 0.2498

上述结果表明，用咔唑法测定时，天然多糖化合物中常见的各种中性单糖在530 nm处也均有程度不同的吸收。
2.2 各单糖浓度与咔唑法测定时在530 nm处吸收值的线性关系：以常用咔唑法(参考2.1.1)测定各单糖吸收标准曲线(其中GalA和GlcA标准溶液的配制为精确称取干燥的糖醛酸10 mg溶于100 mL容量瓶)，其线性回归方程及相关系数如下。
Glc Y=0.4631X+0.004939(r=0.9996)
Gal Y=0.2358X+0.004567(r=0.9993)
Man Y=0.1587X+0.002963(r=0.99