关于PCR引物

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/28 04:19:28
最近接着做别人的实验，要合成引物，但发现不同的文献中其中一引物碱基序列相差1个碱基，原文献是19个碱基，但后来引用的文献都变成了20个碱基(在3'端倒数第二插入了一个T)，不知道哪个才是正确的，请问各位高手有什麽办法呢？
是同一物种，谢谢！

首先，你要知道你克隆的是什么基因，是哪个物种的，你找的文献都是做同一个物种么？
其次，到NCBI上搜索你要克隆的基因序列，与文献上的引物比对一下就知道哪个是对的了
因为不同个体的同一个基因序列是有可能不同的，所以你说的2种引物都有可能对
最后，最好是自己学会设计引物

补充：
1、确定基因名称和物种，到NCBI主页http://www.ncbi.nlm.nih.gov/，以基因名称和物种为关键字搜索，database选Nucleotide

2、搜索结果中有说明，选择你需要的（有时候有一些干扰条目）。
如果是以cDNA或者质粒为模板，一般选择mRNA序列，点进去有个“CDS”，点开就是cDNA序列，可以与你的引物对比一下
如果是以基因组DNA为模板，就要查基因组序列，不过这个应该不常用。

3、其实拿到cDNA序列，可以自己设计引物啊，推荐用primer premier 5设计，很简单。

4、文献上的引物一般没问题，大家用那个引物都做出来了，你肯定也能做的