关于亲和层析

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/29 13:16:26
EDTA和咪唑都可以和柱子上挂的金属离子结合，那为什么EDTA是把金属离子洗下来而咪唑只是竞争性地结合在上面呢？
先谢谢一楼的回答．．不过你貌似回答的不对哦．．我就举个例子，比如sepharose上挂了镍，然后带HIS标签的蛋白与镍结合．那么咪唑是洗下与金属结合的蛋白质．．而EDTA就直接把镍从sepharose上洗下来了．．．我想问的是咪唑和EDTA既然都是与金属螯合．．那这种应用在柱子上的差异是因为什么原因产生的呢？

看了你的补充，总算明白你的困惑是什么了。
蛋白质和镍的结合只是比较松散的结合，只是一种竞争性的结合，但不能彻底使蛋白质变性，具体情况你可以看看生物化学书里的有关竞争性抑制剂的内容
1.EDTA可以和金属离子螯合成稳定（注意是稳定，表示基本很难分离）的化合物，换另一种说法就是，EDTA与金属离子的结合比柱子材料与金属离子的结合能力强，所以EDTA与金属离子结合而从柱子上脱落，表现出来的情况就是EDTA能把金属离子洗下来。EDTA可是著名的螯合剂哦，几乎常见的金属离子它都能与之螯合。所以EDTA把镍+蛋白质洗下来是螯合作用，EDTA与镍螯合，顺带连着蛋白质一起洗脱
2.但咪唑的情况不一样，这里就是竞争性的问题了（还是建议你去看看竞争性抑制剂的内容）
咪唑和镍相比，咪唑与蛋白质的结合能力更强，但咪唑无法与镍结合（或是螯合、总之是个反应）所以咪唑洗下的是蛋白质而不是蛋白质+镍
如果还不明白可以给我发信

不太懂,

厉害!