菌体蛋白饲料中真蛋白的测定方法 （含有真菌）

实验室常用考马斯亮蓝G-250法，不是以测定"氮"含量为基础。马斯亮蓝是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质-考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质-考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质-考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析，呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。但是考马斯亮蓝G250分子含苯环。

也可以用“紫外吸收法”，它也不是以测定“氮”含量为基础，其中以280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。其原理是蛋白质分子中酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比，利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定，三聚氰胺等化合物含有共轭双键的苯环，但是没有肽键，所以238nm处的吸光度值可以排除其它苯环共轭双键的干扰。