UC知道pcr扩增没有条带
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/06/14 14:33:08
请教大家，我用别人肯定能作出来的ISSR体系扩增之后为什么什么条带都没有呢，感觉药品应该没有问题。将DNA稀释100倍后用紫外分光光度计测DNA od260/280 1.8左右，符合要求呀，电泳检测只是轻微拖尾，条带挺亮的，是不是测得DNA浓度不对呢？还有我用的是纯水不知道有没有影响？
SSR用4%PAGE胶检测,加样时一定要注意最后分开加的引物家进去了,而且够量(0.5ul是很少的,要注意).我用的PCR程序是94度10分钟,94度35秒.55度35秒,72度45秒,35循环,最后再10分钟的72度.
你测到的1.8只是说明DNA比较纯,也许模板浓度不够啊,要达到5ng/ul以上才好用,模板浓度太低也扩不出来的.
你跑胶之后有没有引物二聚体的带,如果有,说明模板加的正常,如果没有,可能是加模板没加好.
水只要用灭菌的纯水就行了,没什么的,师兄都说PCR是很粗放,很简单的.加油!!!
你是不是引物加多了啊，PCR后run胶有100bp下有团带吗？还有一点是，“紫外分光光度计测DNA od260/280 1.8”用仪器有时候会有错觉的，当有酒精残余的时候测的也会很好，但是酒精影响PCR。用纯水没什么问题的，DNA浓度也不是个太大的问题，你在看看体系有没有忘加东西。
你是不是跑错胶了？不要用琼脂糖胶跑，要跑PAGE，然后染色或者显影，琼脂糖胶灵敏度低