小鼠成纤维细胞株L929的培养方法

你到丁香园上去问 百度搜一下丁香园 那里才是全国医学行业人员网上的家
这里哪行
成纤维细胞还是非常好养的。

采用DMEM加10%小牛血清培养，效果不错！

rpmi 1640培养基,小牛血清,抗生素(青霉素和链霉素)胰蛋白酶,PBS,EDTA
消化细胞并接种,放入培养基,37度培养,隔天即可观察.培养液变黄时需换液

拿到小鼠成纤维细胞后先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

小鼠成纤维细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备MEM培养基；马血清10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗