高中生物-基因工程

我们正好做过双酶切，呵呵
是这样的，因为我们需要在切下来之后做连接，不能保持它一直都是一个“切口”的状态，如果载体你只切一个口，目的基因也切这么个口，那么连接的时候就混乱了，可能自身闭合，也可能连成长串

但是如果载体切两个不同的口，目的基因也切这么两个口，那么连接的时候就可以1对1的把目的基因和载体给连上来

同一目的基因不同酶切下来的时候，其实两端带了一些无关的碱基的（也可以理解成冗余部分，专门拿来切的。。。呵呵）
条件的话，就是两种酶的切点不能太近，至少要隔10来个碱基，实验起来双酶切可以同时做的（如果可以用同样的缓冲液），不然反复的酶切/跑胶/回收会让dna的含量降到无法继续实验……

这句话是这么个意思，如果你用同一种内切酶切，切下来的DNA片段的黏性末端不是一样的么，那两端各自多余的碱基可能配对然后形成自身连接成环。用不同的内切酶黏性末端就不一样，碱基就配不起来啦。

限制酶就像一把刀一样 而DNA就是一个萝卜
一种酶就是一把刀 不同的酶就是不同的刀 当然这儿的刀在萝卜上切的位置不同
一个萝卜上随便用几把刀都行的

但是为什么一个目的基因需要用到两种（或多种）限制酶，防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环

因为DNA切开后它的粘性末端有自我连接的能力 当一个酶在一条DNA链上有两处酶切位点时 它切出来的一种DNA片段的两端是互补的 所以就会形成一个环状

还有，同时使用的两种限制酶的识别序列有什么条件吗？没有条件

用限制酶切目的基因可产生两个末端，其中用一种限制酶切开一个末端，另一种限制酶切开另一个末端；也可以用一种限制酶切开两个末端，这样防止目的基因再次结合。限制酶的识别位点必须是回文序列。