请教:微生物质粒(化学)转化机制,结交这方面的同好.

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/24 00:58:02
这是从“微生物学与基础免疫学”专业书籍上摘录的部分，因存在某些疑惑特作出如下请教。

（1）人工转化 人工诱导感受态而发生的变化，即人为的对细菌采用理化方法外理，使细菌（甚至是本来不具备自然转化能力的细菌）具有接受外源DNA的能力。有报道称在转化时加入环腺苷酸（cDNA),可以使感受态水平提高一万倍。人工转化是基因工程的基础技术之一，但在大部分情况下是指将外源质粒DNA转化到受体菌中。

（2）原生质体转化 将DNA分子和聚乙二醇（PEG）一同加入原生质体，造成细胞摄取DNA。也可使用电穿孔法，即用高压脉冲电流在细胞膜上击出小孔，使DNA分子通过小孔而导入细胞，又称电转化。适用于多种细菌、放线菌以及真核细胞的转化。

微生物质粒的转化大概分为自然和人工的,众所周知各种细菌转化方式不尽相同,根据上述内容含义和诸位的经验沙门氏菌(肠道菌)能否用上述化学方法进行简单的处理就可转化，即将两菌混合再加化学药物就可形成转化？或者说上述哪一种化学方法有可能行？请赐教.谢谢

先纠正一下，环磷酸腺苷是cAMP而不是cDNA。从提的问题来看，你应该不具备什么分子生物学背景。
首先，你将质粒转化进沙门氏菌的目的何在？一般来说，将外源质粒转入细胞体内是为了获取大量繁殖质粒或是测试质粒中克隆DNA的基因功能。而这些工作，基本都可以由模式生物中的E.coli(细菌)和Yeast（真菌）来完成。而这些菌种（因携带基因功能不同可分为多种细胞系）均可通过商业途径得到。而这些商业销售的菌种均具有易培养转化效率高的特性。所以，除非你有特殊原因，否则完全没有将质粒转入沙门氏菌的必要性。
第二，分子生物学中的质粒转化并不是经由细菌对细菌途径进行的，而是直接将质粒转化入细胞系。质粒要通过商业途径购买（一次购买后，你便可以通过PCR或者转入细胞中培养再提取等方法反复获得），插入你所感兴趣的DNA片段后，直接加入菌株中进行转化，通常来说，转化中所需加入外源质粒的总量在几百纳克左右。如果在两种细菌中直接做质粒转化，转化效率是非常低的。
第三，如果你使用沙门氏菌做试验，那么你的选择性培养基是什么呢？也就是说，你怎么确定你的菌株成功转化了外源质粒呢？
第四，Saccharomyces cerevisiae（即Yeast）转化一般多加入PEG后再进行人工诱导（42摄氏度20分钟），而E.coli的转化相对简单，一般来说，只需人工诱导42摄氏度45秒钟即可。由于沙门氏菌同属细菌，你可以尝试最简单的化学诱导。具体步骤可以参考商业大肠杆菌的质粒转化。