UC知道蛋白质的鉴定提取（高悬赏）
来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/22 20:24:07
我现在有动物细胞破碎后的溶液，想确定溶液中的某种活性蛋白（可能是一个或者是多个蛋白），请问有哪些方法？我只想到做2DE，然后活性追踪可能有用，但是还有哪些可利用的仪器设备可供考虑和选择的，或者其他有效实验方法还是很模糊。请高手点拨一下。谢谢 （答复详细有建设性的可以继续翻N倍加积分，没问题）
这个蛋白不是酶，是一种信号分子，抑或受体接触，它能促进神经细胞生长的，而促进神经细胞生长的物质和途径也有很多，不好给该蛋白定性。假设它是细胞外的分泌蛋白的话。如何分离它呢？ 我就是怕2DE中加SDS分离后结果变性了，再作活性追踪可能失去意义没有结果。
我现在主要是想先分离它，HPLC分离蛋白效果好吗？我一整个细胞破碎液都进HPCL，那我接的物质岂不是非常非常的多？而且该信号物质的量肯定是很少的，单位级别也许是微克ug也许是pg。因为我还没有对该物质有何定性的分析，它相关的峰值范围我也不知道,这是最令我头疼的地方。那把样做次HPLC又能得到何结论呢？你的意思是这样做完一次HPLC后再做活性追踪吗？
1楼所说的单抗柱，也需要事先知道与该蛋白相对应的抗体或抗原吧，是这样么？
4月16日
我也是想到做活性追踪，2DE导致变性的可能性非常大，但是HPLC中使用的波长和萃取剂是甲醇还是乙氰这个还要看看文献。From the perspective of gene or signal transduction的角度有没有可取的方法知道吗？
这个蛋白不是酶，是一种信号分子，抑或受体接触，它能促进神经细胞生长的，而促进神经细胞生长的物质和途径也有很多，不好给该蛋白定性。假设它是细胞外的分泌蛋白的话。如何分离它呢？ 我就是怕2DE中加SDS分离后结果变性了，再作活性追踪可能失去意义没有结果。
我现在主要是想先分离它，HPLC分离蛋白效果好吗？我一整个细胞破碎液都进HPCL，那我接的物质岂不是非常非常的多？而且该信号物质的量肯定是很少的，单位级别也许是微克ug也许是pg。因为我还没有对该物质有何定性的分析，它相关的峰值范围我也不知道,这是最令我头疼的地方。那把样做次HPLC又能得到何结论呢？你的意思是这样做完一次HPLC后再做活性追踪吗？
1楼所说的单抗柱，也需要事先知道与该蛋白相对应的抗体或抗原吧，是这样么？
4月16日
我也是想到做活性追踪，2DE导致变性的可能性非常大，但是HPLC中使用的波长和萃取剂是甲醇还是乙氰这个还要看看文献。From the perspective of gene or signal transduction的角度有没有可取的方法知道吗？
“想确定溶液中的某种活性蛋白”是需要分离还是需要纯化？你说的太笼统了。
分离纯化可直接使用制备型HPLC，当然如果你加了tag的话过柱也是可以的。2DE第二向是变性电泳，如果你要做活性追踪就要当心了。
你的关键问题是蛋白性质、含量都不知道。如果这样的话就要用纯生化手段，大量破碎细胞去分离该蛋白。HPLC分辨率和活性保持率远高于2DE，但由于你不知道该蛋白性质，因此不能确定哪个分离组分是你的目的蛋白，这样就很讨厌。你只能大量的过柱，做活性检测，从高活性组分再做分离如此反复进行，或者你看看有没有文献报道该蛋白的受体或相互作用的蛋白。这样可以用亲和层析来分离。
呃！·！为难
1：先取个试管放适量淀粉，在将细胞液放入试管，用适量的温度水浴加热2-3分钟，再加入斐林试剂，再沸水浴加热，观察是否有砖红色沉淀。如有，则就有淀粉酶。没有，反之。
2：先放蛋白质，再放细胞液等会再放双缩尿试剂使之充分反应，看看是否变为紫色。没变，则有蛋白酶，否则反之。
哎！你想到什么就测什么。举一反三，你还可以检测是否含有葡萄糖氧化呼吸有关的酶，也是用斐林试剂。
过氧化氢酶，将溶液放到过氧化氢里看气泡的放应速度。并使带火星的木条复燃。
DNA水解酶，将溶液放入提取过的DNA中，用二苯胺检测DNA.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。
等等。。
可以考虑使用Blue Native PAGE。
过单抗柱?