如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?

来源:百度知道 编辑:UC知道 时间:2024/05/17 07:10:01
我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段。如果直接测序和经过连接转化后测序两者比较起来有什么优缺点?会影响结果的真实性吗?

楼上说的是一方面。
PCR产物测序也是可以的,可以送粗样,也就是不纯化的,也可以送纯化好的。
但很多公司测的不是很好,所以一般建议转到克隆载体中保存了送菌液或质粒测序。
PCR产物纯化是去除多余的dNTP和引物二聚体。用纯化好的片段连接转化可以降低背景,提高转化效率。通常转化后我们用几种方法来确认转化子,抽质粒酶切是比较可靠的。选择酶切大小与预计一致的克隆去测序。

PCR产物只是一个混合物,也就是说里面的序列是有可能不同的,但是经过连接到质粒上以后, 你挑出的就是单克隆,也就是均一的片段。
所以PCR产物测序有阳性结果后,还有进一步测序确认。