为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来？

来源：百度知道 编辑：UC知道 时间：2024/05/05 07:00:24
我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因，然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL , 0. 1% BSA 2 μL , Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL , 去离子水补足体积至2 0 μL。3 7 ℃水浴反应1 2 h , 2%的琼脂糖凝胶电泳跑完后得到很浅很浅的两个切开的片段，根本就好像没有，我的DNA都到哪里去了，这是怎么回事？请高手指教，万分感谢！

我好像没有积分 不知道这样有没有人帮我？
我用的EB染色，我看到了切出来的很浅很浅很浅的带，几乎就看不见，原先的目的基因直接电泳特别亮啊，它不是变暗一点点的事。

PCR完了以后不能直接加酶切体系去做酶切。整个体系的离子浓度都不对的。这么切不切碎才怪。老老实实的PCR跑胶回收，或者PCR过柱回收再作酶切。变暗是因为体系不对都被切碎了星号反应。

另外PCR体系请扩大一下，25ul做克隆太少了。至少50ul。

跑得时间太久了了~~跑掉了嘎~~~~??

你已经确定自己切开了那么就不存在DNA消失的问题，DNA消失属于操作错误但是见不到明亮条带原因可能来自于你用于染色的物质（不知道你是用EB还是GoldView还是别的什么），请注意显色原理是染色物质嵌入DNA双链之中，被切开后的片段比原片段小，能够结合的染色物质少，相应显色变弱是很正常的。如果你担心自己的DNA片段不见了，那么你可以做一个胶回收然后对回收产物测定一下吸光度值。

哇，我刚刚回答的怎没了

用3.0的胶跑下啦
胶太小空太大，片段切后变小了（起码有一个变为原来的一半）就跑没了